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免疫組化(IHC)是利用抗原與抗體的特異性結(jié)合原理和特殊的標(biāo)記技術(shù),通過化學(xué)反應(yīng)使標(biāo)記抗體顯色,對組織細(xì)胞內(nèi)的特異性抗原進(jìn)行定位、定性、定量檢測的一門技術(shù)。本文主要總結(jié)二抗原理及其特點,以提供更好的選擇。
IHC常用酶標(biāo)二抗原理圖
1. SABC法
原理:SABC法是利用鏈酶親和素(Streptavidin)與生物素(Biotin)*的高度親和力這一生物學(xué)性質(zhì),先將生物素與辣根過氧化物酶(HRP)結(jié)合,形成生物素化HRP,然后與鏈酶親和素按一定比例混合,形成SABC復(fù)合物。用生物素化二抗與第一抗體結(jié)合,再與SABC復(fù)合物聯(lián)結(jié)形成抗原~抗體~生物素化二抗~ SABC復(fù)合物。最后用底物顯色劑顯色。
特點:該法具有靈敏度高以及低背景染色等特點。
2. SP法
原理:根據(jù)生物素(Biotin) 與鏈霉親和素(Streptavidin)具有強(qiáng)結(jié)合力的原理設(shè)計。在一抗(兔源與鼠源)與相應(yīng)的靶抗原結(jié)合后,生物素化標(biāo)記的抗多價二抗與一抗特異結(jié)合;二抗上標(biāo)記的生物素與標(biāo)記了辣根過氧化物酶(HRP)的鏈霉親和素結(jié)合,形成抗原~特異性一抗~生物素化的二抗~HRP 標(biāo)記的鏈霉親和素復(fù)合物。
特點:該法孵育時間短(通常為10min),靈敏度高以及低背景染色等特點。
3. Polymer酶標(biāo)二抗法
原理:該法采用一段多聚氨基酸聚合物做為載體鏈,將該多聚物與二抗結(jié)合,然后可再標(biāo)記上多個HRP/AP酶分子,所以同樣具有很高的信號放大作用。
特點:靈敏度高;操作步驟簡單;無需進(jìn)行內(nèi)源性的生物素封閉。
4. 直接酶標(biāo)二抗法
該法是將HRP/AP酶分子直接標(biāo)記于二抗上。因此需要普通的酶標(biāo)二抗即可完成。實驗簡單,成本低,但是因為沒有信號放大作用,所以對很多表達(dá)豐度不是很高的抗原就可能檢測不到。