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酶免疫分析(enzyme immunoassay，EIA) 是目前臨床應(yīng)用最多的一類(lèi)免疫分析技術(shù)，可分為非均相(或異相)酶免疫測(cè)定和均相酶免疫測(cè)定兩種方法。
均相酶免疫分析法（homogeneous enzyme immunoassay，HEI） 均相酶免疫分析主要有酶擴(kuò)大免疫測(cè)定技術(shù)和克隆酶供體免疫測(cè)定兩種方法。
非均相酶免疫分析法（heterogeneous enzyme immunoassay） 常用的酶免疫分析法多為非均相法，又可分為液相酶免疫法和固相酶免疫法兩種，以后者常用，稱(chēng)為酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）。ELISA是臨床上常用的免疫分析方法，目前常用的酶免疫分析儀都是基于ELISA技術(shù)，稱(chēng)為酶免疫分析儀。
酶免疫分析儀的類(lèi)型、工作原理及基本結(jié)構(gòu)：
根據(jù)儀器結(jié)構(gòu)和自動(dòng)化程度, 針對(duì)固相支持物的不同（如微孔板、試管、小珠、磁微粒等）作為吸附免疫試劑的載體，因而設(shè)計(jì)成不同的酶免疫分析儀，其基本工作原理就是分光光度法，在光電比色計(jì)或分光光度計(jì)的基礎(chǔ)上根據(jù)ELISA技術(shù)的特點(diǎn)而設(shè)計(jì)。包括：
微孔板固相酶免疫測(cè)定儀器 國(guó)際上微孔板式ELISA使用的載體為96孔板，采用直接對(duì)微板孔測(cè)定吸光度（A）的比色計(jì)。
1、酶標(biāo)儀
酶標(biāo)儀也稱(chēng)為ELISA測(cè)讀儀（ELISA reader）,有單通道和多通道兩種類(lèi)型。自動(dòng)型多通道酶標(biāo)儀有多個(gè)光束和多個(gè)光電檢測(cè)器，檢測(cè)速度快。如8通道的儀器，設(shè)有8條光束（或8個(gè)光源）、8個(gè)檢測(cè)器和8個(gè)放大器。多通道酶標(biāo)儀的檢測(cè)速度較快。
酶標(biāo)儀的工作原理與主要結(jié)構(gòu)和光電比色計(jì)幾乎全相同（見(jiàn)圖16-1）。既可以使用和分光光度計(jì)相同的單色器，也可以使用干涉濾光片來(lái)獲單色光，此時(shí)將濾光片置于微孔板的前、后的效果是一樣的。
酶標(biāo)儀工作原理
酶標(biāo)儀的工作原理和光路與普通光電比色計(jì)的不同之處在于（見(jiàn)圖16-2） ：比色液的容器不是比色皿，而是用塑料微孔板；酶標(biāo)儀以垂直光束通過(guò)微孔板中的待測(cè)液；酶標(biāo)儀通常使用光密度OD來(lái)表示吸光度。現(xiàn)在大部分的酶標(biāo)儀還加上了判讀系統(tǒng)和軟件操作分析系統(tǒng)等。
酶標(biāo)儀光路系統(tǒng)簡(jiǎn)圖
2、半自動(dòng)微孔板式ELISA分析儀
半自動(dòng)微孔板式ELISA分析儀在酶標(biāo)儀的基礎(chǔ)上再配置加液器、溫育器、洗板機(jī)和測(cè)讀儀等分別組成。測(cè)定中需由手工將微孔板移至下一步驟的儀器中進(jìn)行。洗板機(jī)要求洗滌后固相表面非特異性物質(zhì)洗滌干凈，吸液后每孔中殘留的液量極小。較精密的洗板機(jī)有可調(diào)節(jié)的定時(shí)、洗滌液定量及振蕩微孔板的功能。
3、全自動(dòng)微孔板式ELISA分析儀
自動(dòng)化酶免疫分析系統(tǒng)由加樣系統(tǒng)、溫育系統(tǒng)、洗板系統(tǒng)、判讀系統(tǒng)、機(jī)械臂系統(tǒng)、液路動(dòng)力系統(tǒng)、軟件控制系統(tǒng)等組成，這些系統(tǒng)既獨(dú)立又緊密聯(lián)系。全自動(dòng)微孔板式ELISA分析儀用在大批量標(biāo)本的檢測(cè)中，不但提高了工作效率，而且測(cè)定的精密度亦得到改善。微孔板式ELISA儀器均為開(kāi)放式的，即適用于所有微板式ELISA試劑。ELISA檢測(cè)結(jié)果的精密度主要取決于試劑的質(zhì)量。全自動(dòng)ELISA儀器本身的精密度一般在3%左右。應(yīng)用優(yōu)質(zhì)試劑測(cè)定結(jié)果的精密度，定量測(cè)定可達(dá)到7%以下；常用的定性測(cè)定為感染性疾病抗原、抗體的檢測(cè)，精密度在10%左右。
4、管式固相酶免疫測(cè)定儀
應(yīng)用管式固相載體的ELISA分析儀器不多，在我國(guó)應(yīng)用的有：
① 1990年德國(guó)推出的全自動(dòng)管式ELISA分析系統(tǒng)和配套試劑。試劑包括用鏈霉親和素包被的聚苯乙烯管、生物素結(jié)合的抗原或抗體，辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的抗體和顯色底物ABTS。測(cè)定中標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)可使用2星期，每次測(cè)定只需一點(diǎn)定標(biāo)。測(cè)定的精密度CV在3%左右。測(cè)定項(xiàng)目齊全，包括激素、腫瘤標(biāo)志、心肌標(biāo)志和感染性疾病的抗原、抗體等。② 法國(guó)生產(chǎn)的是一種特殊形狀的管式全自動(dòng)ELISA的分析儀，配套使用一個(gè)特別的“試劑條"（reagent strip）。
5、微粒固相酶免疫測(cè)定儀
美國(guó)生產(chǎn)自動(dòng)酶免疫分析儀應(yīng)用聚苯乙烯微粒（顆粒直徑0.47μm）作為固相，特異抗體或抗原包被在微粒上。第一次抗原抗體反應(yīng)后，將反應(yīng)液通過(guò)特制的玻璃纖維膜，聚苯乙烯微粒吸附在玻璃纖維膜上，液體則通過(guò)膜濾出。以后的反應(yīng)在膜上進(jìn)行，用過(guò)濾方式洗滌。標(biāo)記酶為堿性磷酸酶，底物為4-甲基傘酮磷酸酶，反應(yīng)后進(jìn)行熒光測(cè)定。其后生產(chǎn)的作藥物測(cè)定的熒光偏振分析儀與一體多項(xiàng)目全自動(dòng)免疫分析儀也在檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室廣泛應(yīng)用。
6、磁微粒固相酶免疫測(cè)定儀
磁微粒可用磁鐵吸引與液相分離，是免疫測(cè)定中較為理想的固相載體，較早應(yīng)用磁微粒作為酶免疫測(cè)定固相的是瑞士出品的分析系統(tǒng)，由分光光度測(cè)讀儀、磁鐵板和試劑3部分組成。試劑包括抗異硫氰酸熒光素（FITC）抗體，特異抗體或抗原包被的磁微粒（顆粒直徑1μm），F(xiàn)ITC結(jié)合的特異抗體或抗原，堿性磷酸酶標(biāo)記的特異抗體或抗原及底物酚肽（phenolphthalein）磷酸酯。其應(yīng)用的抗FITC-抗體是與親和素-生物素原理相同的間接包被系統(tǒng)，反應(yīng)模式與電化學(xué)發(fā)光免疫測(cè)定亦相似。反應(yīng)在試管中進(jìn)行，基本上用手工操作。反應(yīng)結(jié)束后將試管架放在磁鐵板上，磁微粒被磁鐵吸引至管底，完成固相與液相的分離。酶作用后反應(yīng)液呈粉紅色。
