小鼠組織蛋白去乙?;福℉D)ELISA試劑盒 |
點(diǎn)擊次數(shù):731 發(fā)布時(shí)間:2019/5/23 |
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上海撫生實(shí)業(yè)有限公司 |
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小鼠組織蛋白去乙酰化酶(HD)ELISA試劑盒 用途 該試劑盒用于體外定量檢測(cè)血清、血漿或其他相關(guān)生物液體中濃度。 檢測(cè)原理 本試劑盒采用雙抗體夾心ELISA法。用抗體包被于酶標(biāo)板上,實(shí)驗(yàn)時(shí)樣品或標(biāo)準(zhǔn)品中的抗原會(huì)與包被抗體結(jié)合,游離的成分被洗去。依次加入生物素化的抗體和辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的親和素??贵w與結(jié)合在包被抗體上的抗原結(jié)合、生物素與親和素特異性結(jié)合而形成免疫復(fù)合物,游離的成分被洗去。加入顯色底物(TMB),TMB在辣根過(guò)氧化物酶的催化下呈現(xiàn)藍(lán)色,加終止液后變成黃色。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)處測(cè)OD值,抗原濃度與OD450值之間呈正比,通過(guò)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算出樣品中指標(biāo)的濃度。 操作步驟 1. 標(biāo)準(zhǔn)品的加樣:設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔,標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL;。 2. 加樣:分別設(shè)空白孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測(cè)樣品10μl(樣品終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻。 3. 加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑100μl,空白孔除外。 4. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育60分鐘。 5. 配液:將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用。 6. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿(mǎn)洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。 7. 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘. 8. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。 9. 測(cè)定:以空白孔調(diào)零,450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度(OD值)。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以?xún)?nèi)進(jìn)行。 試驗(yàn)所需自備物品 1. 酶標(biāo)儀(450nm波長(zhǎng)濾光片) 2. 高精度移液器,EP管及一次性吸頭:0.5-10 μL, 2-20 μL, 20-200 μL, 200-1000 μL 3. 37℃恒溫箱,雙蒸水或去離子水 4. 吸水紙 |
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