一文輕松學(xué)會(huì)如何使用RT-PCR試劑盒
點(diǎn)擊次數(shù):5817 更新時(shí)間:2020-04-03
RT-PCR試劑盒是一種敏感性高,特異性強(qiáng),重復(fù)性好的實(shí)驗(yàn)診斷方法,由于其試劑穩(wěn)定,易保存,操作簡(jiǎn)便,結(jié)果判斷較客觀等因素,已廣泛應(yīng)用在免疫學(xué)檢。
下面小編要為大家介紹的是RT-PCR試劑盒詳細(xì)操作規(guī)程:
1、使用前請(qǐng)先將試劑盒在室溫下平衡半小時(shí)。
2、空白孔不加樣,只加顯色劑A,B和終止液用于調(diào)零。
3、標(biāo)準(zhǔn)品孔:每孔加入稀釋好的標(biāo)準(zhǔn)品50μl,零孔加入標(biāo)準(zhǔn)品/樣品稀釋液50μl,然后加入生物素抗原工作液50μl(零孔必須要做,并將其作為標(biāo)曲的后一個(gè)點(diǎn))。
4、樣品孔:加入樣品50μl,然后加入生物素抗原工作液50μl。
5、輕輕搖晃,蓋上封板膜,37℃培養(yǎng)箱中孵育30min。
6、將25倍濃縮洗滌液用蒸餾水25倍稀釋后備用。
7、次洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。
8、加入50μl親和素-HRP到標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣品孔中,輕輕搖晃,蓋上封板膜,37℃培養(yǎng)箱中孵育30min。
9、第二次洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。
10、顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色10分鐘。
11、終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)。
12、測(cè)定:以空白孔調(diào)零,450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度,測(cè)定應(yīng)在加終止液后10分鐘以內(nèi)進(jìn)行。
13、計(jì)算:ADP試劑盒;RT-PCR試劑盒根據(jù)濃度和OD值算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的回歸方程,建議用計(jì)算軟件進(jìn)行計(jì)算,推薦使用ELISAcalc進(jìn)行計(jì)算,擬合模型選用logistic曲線。