試劑的組成和配制:
提取液:液體 100mL×1 瓶,4℃保存;
試劑一:液體 5mL×1 瓶,4℃保存;
試劑二:液體 200μL×1 支,4℃保存;
試劑三:液體 4mL×1 瓶,4℃保存;
試劑四:粉劑×2 瓶,4℃保存。
產(chǎn)品簡介:
產(chǎn)品名稱:原花青素(PC)試劑盒品牌
規(guī)格:24樣 48樣
貨號:AS022
檢測方法:可見分光光度法 微板法
產(chǎn)品分類:氧化應激系列
貯存溫度:2~8℃。
本試劑盒保質(zhì)期:6個月。本產(chǎn)品僅用于科研實驗。
所需的儀器和用品:
可見分光光度計、1mL 玻璃比色皿(光徑 1cm)、低溫離心機、移液器、研缽、冰和蒸餾水
四、超氧化物歧化酶(SOD)的測定:
建議正式實驗前選取 2 個樣本做預測定,了解本批樣品情況,熟悉實驗流程,避免實驗
樣本和試劑浪費!
1、樣本制備
① 組織樣本:
取約 0.1g 組織(水分充足的樣本可取 0.25g),加入 1mL 提取液,在 4oC 或冰浴進行
勻漿(或使用各類常見勻漿器)。4oC×12000rpm 離心 10min,取上清作為待測液。
【注】:若增加樣本量,可按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例進行提取
② 細菌/細胞樣本:
先收集細菌或細胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;取約 500 萬細菌或細胞加入 1mL
提取液,超聲波破碎細菌或細胞(冰浴,功率 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復 30 次);
12000rpm 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測。
【注】:若增加樣本量,可按照細菌/細胞數(shù)量(10
4):提取液(mL)為 500~1000:1 的比例進行提取。 ③ 液體樣本:直接檢測;若渾濁,離心后取上清檢測。
N6培養(yǎng)基 英文名稱:N6 Medium 產(chǎn)品規(guī)格:250g
NLN培養(yǎng)基 英文名稱:NLN Medium 產(chǎn)品規(guī)格:250g
white培養(yǎng)基 英文名稱:White Medium 產(chǎn)品規(guī)格:250g
NS培養(yǎng)基 英文名稱:NS Medium 產(chǎn)品規(guī)格:250g
NB培養(yǎng)基 英文名稱:NB Medium 產(chǎn)品規(guī)格:250g
RNS培養(yǎng)基 英文名稱: 產(chǎn)品規(guī)格:250g
DPD培養(yǎng)基 英文名稱:DPD Medium 產(chǎn)品規(guī)格:250g
WPM培養(yǎng)基 英文名稱:WPM Medium 產(chǎn)品規(guī)格:250g
MT培養(yǎng)基 英文名稱:MT,Medium 產(chǎn)品規(guī)格:250g
C81V培養(yǎng)基 英文名稱:C81V Medium 產(chǎn)品規(guī)格:250g
原花青素(PC)試劑盒品牌關黃柏 規(guī)格: 0.5g
130567-83-8羅漢果III 規(guī)格: HPLC≥98%;20mg
548-04-9金絲桃 規(guī)格: HPLC≥98%,10mg/vial
53956-04-0甘草銨 規(guī)格: 20mg
481-18-5Α-波菜甾 規(guī)格: HPLC≥98%;20mg
404-86-4天然辣椒 規(guī)格: 20mg
520-11-6澤蘭黃;6-Methoxyluteol 規(guī)格: 20mg
63903-51-5植鋅 規(guī)格: 20mg
177325-13-2左氧星 規(guī)格: 100mg
4547-24-4科羅索 規(guī)格: 20mg
操作步驟:
實驗開始前,各試劑均應平衡至室溫(試劑不能直接在37℃溶解);試劑或樣品稀釋時,均需混勻,混勻時盡量避免起泡。實驗前應預測樣品含量,如樣品濃度過高時,應對樣品進行稀釋,以使稀釋后的樣品符合試劑盒的檢測范圍,計算時再乘以相應的稀釋倍數(shù)。
1. 加樣:分別設空白孔、標準孔、待測樣品孔??瞻卓准訕悠废♂屢?00μl,余孔分別加標準品或待測樣品100μl,注意不要有氣泡,加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻,酶標板加上蓋或覆膜,37℃反應120分鐘。為保證實驗結(jié)果有效性,每次實驗請使用新的標準品溶液。
2. 棄去液體,甩干,不用洗滌。每孔加檢測溶液A工作液 100μl(在使用前一小時內(nèi)配制),酶標板加上覆膜, 37℃反應60分鐘。
3. 溫育60分鐘后,棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分鐘,大約400μl/每孔,甩干(也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干)。
4. 每孔加檢測溶液B工作液(同檢測A工作液) 100μl,酶標板加上覆膜37℃反應60分鐘。
5. 溫育60分鐘后,棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分鐘,350μl/每孔,甩干(也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干)。
6. 依序每孔加底物溶液90μl,酶標板加上覆膜37℃避光顯色(30分鐘內(nèi),此時肉眼可見標準品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色,后3-4孔梯度不明顯,即可終止)。
7. 依序每孔加終止溶液50μl,終止反應,此時藍色立轉(zhuǎn)黃色。終止液的加入順序應盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實驗結(jié)果的準確性,底物反應時間到后應盡快加入終止液。
8. 用酶聯(lián)儀在450nm波長依序測量各孔的光密度(OD值)。在加終止液后立即進行檢測。