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米曲霉通用型染料法熒光定量PCR試劑盒品牌

簡要描述:

米曲霉通用型染料法熒光定量PCR試劑盒品牌的相關產(chǎn)品:AFP(A4) 甲胎蛋白單克隆抗體(檢測) 規(guī)格: 0.2ml
VAP1 管粘附蛋白1抗體 規(guī)格: 0.1ml
MTGR1 髓易位基因相關蛋白1抗體 規(guī)格: 0.2ml
Rabbit Anti-horse IgG/PE-CY5 PE-CY5標記的兔抗馬IgG 規(guī)格: 0.1ml

更新時間:2022-02-15

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米曲霉通用型染料法熒光定量PCR試劑盒品牌

PCR實驗方法步驟:

方法

1:在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。

10×PCR buffer

5 μl     dNTP mix (2mM)

4 μl     引物1(10pM)

2 μl     引物2(10pM)

2 μl     Taq酶 (2U/μl)

1 μl     DNA模板(50ng-1μg/μl)

1 μl      加ddH2O至 50 μl

產(chǎn)品特點:

◇高特異性:與其他病毒無交叉反應,無非特異性擴增;

◇高靈敏度:檢測靈敏度可達10~100拷貝;

◇操作簡便:該系列所有試劑均采用相同的體系和條件,可同時進行多個檢測;

◇高通量:多種雙重PCR檢測以及三重PCR檢測試劑盒。

操作流程:

收集基因信息——>設計引物——>PCR ——>回收目的片段——>與載體連接,取得連接產(chǎn)物 ——> 用感受態(tài)細胞做轉化 ——>接菌——>陽性克隆(酶切法或PCR)——>質(zhì)粒抽提——>質(zhì)粒測序——>測序結果分析——>克隆信息輸入數(shù)據(jù)庫——>質(zhì)粒實物保存。

特別提示:本公司的所有產(chǎn)品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途!

產(chǎn)品名稱

規(guī)格

貨號

米曲霉通用型染料法熒光定量PCR試劑盒品牌

50次

FS-01H3669

 


操作流程.jpg

 

實時熒光定量PCR:

實時熒光定量PCR技術有效地解決了傳統(tǒng)定量只能終點檢測的局限,實現(xiàn)了每一輪循環(huán)均檢測一次熒光信號的強度,并記錄在電腦軟件之中,通過對每個樣品Ct值的計算,根據(jù)標準曲線獲得定量結果。因此,實時熒光定量PCR無需內(nèi)標是建立在兩個基礎之上的:

1)Ct值的重現(xiàn)性PCR循環(huán)在到達Ct值所在的循環(huán)數(shù)時,剛剛進入真正的指數(shù)擴增期(對數(shù)期),此時微小誤差尚未放大,因此Ct值的重現(xiàn)性同一模板不同時間擴增或同一時間不同管內(nèi)擴增,得到的Ct值是恒定的。

2)Ct值與起始模板的線性關系由于Ct值與起始模板的對數(shù)存在線性關系,可利用標準曲線對未知樣品進行定量測定,因此,實時熒光定量PCR是一種采用外標準曲線定量的方法。

外標準曲線的定量方法相比內(nèi)標法是一種準確的、值得信賴的科學方法。利用外標準曲線的實時熒光定量PCR是迄今為止定量最準確,重現(xiàn)性定量方法,已得到的*,廣泛用于基因表達研究、轉基因研究,藥物療效考核、病原體檢測等諸多領域。

定量PCR方法:

a、競爭法

選擇由突變克隆產(chǎn)生的含有一個新內(nèi)切位點的外源競爭性模板。在同一反應管中,待測樣品與競爭模板用同一對引物同時擴增(其中一個引物為熒光標記)。擴增后用內(nèi)切酶消化PCR產(chǎn)物,競爭性模板的產(chǎn)物被酶解為兩個片段,而待測模板不被酶切,可通過電泳或高效液相將兩種產(chǎn)物分開,分別測定熒光強度,根據(jù)已知模板推測未知模板的起始拷貝數(shù)。

b、內(nèi)參照法

在不同的PCR反應管中加入已定量的內(nèi)標和引物,內(nèi)標用基因工程方法合成。上游引物用熒光標記,下游引物不標記。在模板擴增的同時,內(nèi)標也被擴增。在PCR產(chǎn)物中,由于內(nèi)標與靶模板的長度不同,二者的擴增產(chǎn)物可用電泳或高效液相分離開來,分別測定其熒光強度,以內(nèi)標為對照定量待檢測

使用方法:

一、稀釋標準曲線樣品(以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例)。由于標準品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。

1. 標記 6 個離心管,分別為 7,6,5,4,3,2。

2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液,*用帶芯槍頭,下同)。

3. 在 7 號管中加入 5 μL 陽性對照(濃度為 1×10E8 拷貝/μL,試劑盒提供),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E7 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。

4. 換槍頭,在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E6 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。

5. 換槍頭,在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E5 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。

6. 重復上面的操作直到得到 6 個稀釋度的標準曲線樣品。放冰上待用。

二、樣品 DNA 的制備

7. 用自選方法純化樣品的 DNA,本產(chǎn)品跟市場上絕大多數(shù)核酸純化產(chǎn)品兼容。

8. 如果有 N 個樣品,則需要進行 N+2 個樣品提取,多出的一個用作樣品制備陽性對照管、另一個用作樣品制備陰性對照管。

三、設置 qPCR 反應(20μL 體系,在樣品制備室進行)

9. 如果做定量分析并且只做 1 次重復,則標記 N+9 個 PCR 管,其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品,1 個用于 PCR 陰性對照(用水做模板),6 個用于標準曲線。如果做定性分析,并且只做 1 次重復,則標記 N+4 個 PCR 管,其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品,1 個用于 PCR 陰性對照(用水做模板),1 個用于PCR 陽性對照。

20697-20-5醉椒苫 規(guī)格: HPLC≥98%;10mg

3738-70-3 規(guī)格: 20mg

4773-96-0芒果 規(guī)格: 20mg

58546-56-8五味子酯甲 規(guī)格: HPLC≥98%;20mg

55466-05-2棗仁皂B 規(guī)格: 20mg

6807-83-6三葉豆紫檀;Trifolirhizin 規(guī)格: 20mg

58316-41-9柴胡皂B2 規(guī)格: 20mg

粘委陵菜 規(guī)格: 1g

4075-81-4鈣;純品型;標準品;有證書 規(guī)格: 0.1g

482-38-2 規(guī)格: 20mg

米曲霉通用型染料法熒光定量PCR試劑盒品牌UHRF1  核95抗體 規(guī)格: 0.2ml

TSBP  睪特異抗體 規(guī)格: 0.2ml

HBsAg  人乙肝表面抗原抗體(包被) 規(guī)格: 0.1ml

Acetyl-Histone H3(K23)  乙?;MH3抗體 規(guī)格: 0.2ml

KCND1/Kv4.1  電壓門控鉀通道Kv4.1抗體 規(guī)格: 0.2ml

FGF23  成纖維細胞生因子23抗體 規(guī)格: 0.2ml

YY1AP1/HCCA2  肝相關2抗體(轉錄因子YY1結合1抗體) 規(guī)格: 0.2mlGoat Anti-Chicken IgG/Bio  標記的羊抗雞IgG 規(guī)格: 0.1ml

FBXL17  FBXL17抗體 規(guī)格: 0.2mlIL-18R alpha/CD218a  白細胞介-18受體α鏈抗體 規(guī)格: 0.2ml

Zfp91  白病相關新基因抗體 規(guī)格: 0.2ml

CD4  CD4抗體 0.1mlFOXO1  叉O1抗體 規(guī)格: 0.1ml

KChIP2  鉀通道相互作用2抗體 規(guī)格: 0.2ml

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