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禽偏肺病毒(aMPV)檢測試劑盒(熒光-PCR法)

簡要描述:

禽偏肺病毒(aMPV)檢測試劑盒(熒光-PCR法)的相關產品:CLN6 神經細胞蠟樣質脂褐質沉積蛋白CLN6抗體 規(guī)格: 0.2ml
LRRTM1 富含亮氨酸重復跨膜神經元蛋白1抗體 規(guī)格: 0.2ml
HE4/Epididymal secretory protein E4 附睪分泌蛋白4抗體 0.2ml
CYP7A1 細胞色素P450 7A1抗體/膽固醇7a羥化酶 規(guī)格: 0.2ml

更新時間:2022-02-23

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禽偏肺病毒(aMPV)檢測試劑盒(熒光-PCR法)

使用方法:

一、稀釋標準曲線樣品(以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例)。由于標準品濃度非常高,因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行,千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分)。

1. 標記 6 個離心管,分別為 7,6,5,4,3,2。

2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液,*用帶芯槍頭,下同)。

3. 在 7 號管中加入 5 μL 陽性對照(濃度為 1×10E8 拷貝/μL,試劑盒提供),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E7 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。

4. 換槍頭,在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E6 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。

5. 換槍頭,在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得),充分震蕩 1 分鐘,得 1×10E5 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。

6. 重復上面的操作直到得到 6 個稀釋度的標準曲線樣品。放冰上待用。

二、樣品 DNA 的制備

7. 用自選方法純化樣品的 DNA,本產品跟市場上絕大多數(shù)核酸純化產品兼容。

8. 如果有 N 個樣品,則需要進行 N+2 個樣品提取,多出的一個用作樣品制備陽性對照管、另一個用作樣品制備陰性對照管。

三、設置 qPCR 反應(20μL 體系,在樣品制備室進行)

9. 如果做定量分析并且只做 1 次重復,則標記 N+9 個 PCR 管,其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品,1 個用于 PCR 陰性對照(用水做模板),6 個用于標準曲線。如果做定性分析,并且只做 1 次重復,則標記 N+4 個 PCR 管,其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品,1 個用于 PCR 陰性對照(用水做模板),1 個用于PCR 陽性對照。

操作流程:

收集基因信息——>設計引物——>PCR ——>回收目的片段——>與載體連接,取得連接產物 ——> 用感受態(tài)細胞做轉化 ——>接菌——>陽性克隆(酶切法或PCR)——>質粒抽提——>質粒測序——>測序結果分析——>克隆信息輸入數(shù)據(jù)庫——>質粒實物保存。

特別提示:本公司的所有產品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他非科研用途!

產品名稱

規(guī)格

貨號

禽偏肺病毒(aMPV)檢測試劑盒(熒光-PCR法)

50T

FS-01H4247

 


操作流程.jpg

 

PCR實驗方法步驟:

方法

1:在冰浴中,按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。

10×PCR buffer

5 μl     dNTP mix (2mM)

4 μl     引物1(10pM)

2 μl     引物2(10pM)

2 μl     Taq酶 (2U/μl)

1 μl     DNA模板(50ng-1μg/μl)

1 μl      加ddH2O至 50 μl

產品特點:

◇高特異性:與其他病毒無交叉反應,無非特異性擴增;

◇高靈敏度:檢測靈敏度可達10~100拷貝;

◇操作簡便:該系列所有試劑均采用相同的體系和條件,可同時進行多個檢測;

◇高通量:多種雙重PCR檢測以及三重PCR檢測試劑盒。

實時熒光定量PCR:

實時熒光定量PCR技術有效地解決了傳統(tǒng)定量只能終點檢測的局限,實現(xiàn)了每一輪循環(huán)均檢測一次熒光信號的強度,并記錄在電腦軟件之中,通過對每個樣品Ct值的計算,根據(jù)標準曲線獲得定量結果。因此,實時熒光定量PCR無需內標是建立在兩個基礎之上的:

1)Ct值的重現(xiàn)性PCR循環(huán)在到達Ct值所在的循環(huán)數(shù)時,剛剛進入真正的指數(shù)擴增期(對數(shù)期),此時微小誤差尚未放大,因此Ct值的重現(xiàn)性同一模板不同時間擴增或同一時間不同管內擴增,得到的Ct值是恒定的。

2)Ct值與起始模板的線性關系由于Ct值與起始模板的對數(shù)存在線性關系,可利用標準曲線對未知樣品進行定量測定,因此,實時熒光定量PCR是一種采用外標準曲線定量的方法。

外標準曲線的定量方法相比內標法是一種準確的、值得信賴的科學方法。利用外標準曲線的實時熒光定量PCR是迄今為止定量最準確,重現(xiàn)性定量方法,已得到的*,廣泛用于基因表達研究、轉基因研究,藥物療效考核、病原體檢測等諸多領域。

定量PCR方法:

a、競爭法

選擇由突變克隆產生的含有一個新內切位點的外源競爭性模板。在同一反應管中,待測樣品與競爭模板用同一對引物同時擴增(其中一個引物為熒光標記)。擴增后用內切酶消化PCR產物,競爭性模板的產物被酶解為兩個片段,而待測模板不被酶切,可通過電泳或高效液相將兩種產物分開,分別測定熒光強度,根據(jù)已知模板推測未知模板的起始拷貝數(shù)。

b、內參照法

在不同的PCR反應管中加入已定量的內標和引物,內標用基因工程方法合成。上游引物用熒光標記,下游引物不標記。在模板擴增的同時,內標也被擴增。在PCR產物中,由于內標與靶模板的長度不同,二者的擴增產物可用電泳或高效液相分離開來,分別測定其熒光強度,以內標為對照定量待檢測

1415-73-2蘆薈;barbaloin 規(guī)格: 20mg

465-99-6常春藤皂元 規(guī)格: 20mg

苑子 規(guī)格: 1g

戊乙奎 規(guī)格: 100mg

25406-64-8莫諾 規(guī)格: 20mg

環(huán)氧 規(guī)格: 5ml

529-53-3野黃芩 規(guī)格: HPLC≥98%;20mg

58-55-9 規(guī)格: 50mg

58-61-7腺;Adesine 規(guī)格: 20mg

36052-37-6山姜 規(guī)格: 20mg

禽偏肺病毒(aMPV)檢測試劑盒(熒光-PCR法)PTBP1  核糖核結合1抗體 規(guī)格: 0.2ml

Lpin1 protein  Lpin1 抗體 規(guī)格: 0.2ml

KAT13A/SRC1  類固受體激活1抗體 規(guī)格: 0.2ml

CYLD  微管結合CYLD抗體 規(guī)格: 0.1ml

NEDD8  泛樣NEDD8抗體 規(guī)格: 0.2mlphospho-GABBR1 (Ser923)  磷化gamma氨基丁B型受體1抗體 規(guī)格: 0.1ml

SLC27A5  脂肪轉運5抗體 0.2ml

PTRH2  Bcl-2轉錄抑制因子1抗體 規(guī)格: 0.2ml

Glu-Glu Tag  Glu-Glu tag抗體 規(guī)格: 0.1ml

NOS-3/eNOS  氮合成-3抗體(內皮型) 規(guī)格: 0.1ml

TRT/TERT  端粒反轉錄抗體 規(guī)格: 0.1ml

Integrin Alpha V + Beta 5  整合αVβ5抗體 規(guī)格: 0.1ml

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