在线观看免费视频伊人网-亚洲人妻一区二区三区av-免费观看国外美女啪啪动感视频-国产精品久久久18成人

產品列表PRODUCTS LIST

首頁>產品中心>PCR相關試劑>RNA相關產品>6min Fast 1st cDNA Synthesis Kit

6min Fast 1st cDNA Synthesis Kit

簡要描述:

6min Fast 1st cDNA Synthesis Kit公司正在出售的產品:白鰱尾鰭細胞 甘肽還原封閉多肽 基孔肯尼雅病毒PCR檢測試劑盒 大鼠色上皮衍生因子(PEDF)ELISA檢測試劑盒 鳥氨轉氨(OAT)活性比色法檢測試劑盒 預研菌 16號染色體開放閱讀框48抗體

更新時間:2024-01-12

分享到: 1
在線留言
6min Fast 1st cDNA Synthesis Kit

公司產品僅供科研研究使用、不得用于臨床診斷!

貨號

產品名稱

規(guī)格

A-PJ1074

6min Fast 1st cDNA Synthesis Kit

100T

描述:本試劑盒采用穩(wěn)定高效的反轉錄預混體系 5×Fast RT MasterMix 進行 RNA 的反轉錄反應,使用時只需加入模板、 引物和 RNase Free H2O 即可,大大簡化了操作過程、提高 了效率、減少了操作過程中的人為誤差。 該預混體系包含快速 MLV7 反轉錄酶、dNTP、反應 Buffer 和 RNase Inhibitor。該試劑盒采用的 MLV7 反轉錄酶 具有以下特性:RNase H 活性缺失,從而避免反轉錄過程中 降解 RNA;經過突變文庫篩選,使得其熱穩(wěn)定性更強,可耐 受 50℃ 高溫反應,在 60℃ 條件下仍然具有 30%以上活性, 利于打開 RNA 二級結構,從而提高復雜 RNA 模板的擴增性 能;含有快速合成結構域,將 MLV 的延伸速度提高了 3-4 倍,因此適用于快速反轉錄反應;優(yōu)化的反轉錄 Buffer 系統(tǒng), 可以獲得更高產量的 cDNA,從而提高后續(xù)檢測的靈敏度。 合成的第一鏈 cDNA 可廣泛用于 2nd Strand 的合成、雜交、 PCR 擴增、Real-Time PCR 反應等。

應用:
(1)該制品可有效反轉錄 mRNA、tRNA、LncRNA、ncRNA
(2)該制品不可反轉錄 microRNA
組分

儲存:請置于-20°C,可保存 3 年;避免反復凍融。
1. 按以下組分配制反轉錄反應液
Total RNA or Poly(A) RNA 0.1-2 μg
5×Fast RT MasterMix 4 μl
*20×Oligo dT(25)&Random Primer 1 μl
Rnase Free H2O Up to 20 μl
*注:反轉錄引物可根據需要改用特異性引物。
2.反應程序
 50°C 5 min(cDNA 合成)
 95°C 1 min(失活 MLV)
3. 采用 0.25-2μl 反轉錄產物,作為后續(xù)定量 PCR 或 PCR的擴增模板即可。

6.png


5.png

PCR 反應需要使用哪些試劑和設備?

試劑:
模板DNA:PCR反應需要模板DNA,如從細胞、組織、血液中提取DNA等;引物:PCR反應的兩個引物,分別與模板DNA的兩端配對擴增所需的特定區(qū)域,引物也可以合成為TA克隆等過程中使用到的引物;dNTPs:PCR反應中需要四種dNTPs,包括脫氧腺苷酸(dATP)、脫氧胸苷酸(dCTP)、脫氧鳥苷酸(dGTP)、脫氧胞嘧啶酸(dTTP),用于細胞分裂、DNA合成等生物學過程,用于PCR擴增的模板DNA鏈的延伸和擴增;Taq DNA聚合酶:PCR反應需要的聚合酶,一般使用Taq聚合酶,還有一些其他種類的聚合酶如PFU、Phusion等,用于擴增DNA鏈;PCR buffer溶液:對PCR反應具有緩沖作用,調節(jié)反應pH,硫代硫酸氫鹽SDS、小分子有機化合物如甲醛,可增強PCR反應特異性,從而提高反應效率;酶切體系:PCR擴增往往涉及到重組、構建和測序等等實驗步驟,常常需要進行酶切操作。MARK:一種分子量標準,用來判別DNA片段大小的工具。DNA純化試劑盒:用于純化PCR反應產物;
設備:
PCR儀:用于控制反應溫度,保證PCR反應時不同溫度環(huán)節(jié)的嚴格控制;電泳槽:用于分離PCR擴增產物;核酸提取儀:從組織樣本中全自動提取核酸。  這些試劑和設備在PCR分子生物學技術中均是,只有在有序齊全的基礎上,才能進行PCR反應并得出準確結果。

PCR相關基礎實驗:

PCR反應基本步驟一般的聚合酶鏈式反應由20到35個循環(huán)組成,每個循環(huán)包括以下3個步驟:

一、變性:

利用高溫(93-98℃)使雙鏈DNA分離。高溫將連接兩條DNA鏈的氫鍵打斷。在第一個循環(huán)之前,通常加熱長一些時間以確保模板和引物分離,僅以單鏈形式存在。該步驟時間1-2分鐘,接下來PCR儀就控制溫度進入循環(huán)階段。

二、退火或稱接合,復性:

在DNA雙鏈分離后,降低溫度使得引物可以結合于單鏈DNA上。此階段的溫度通常低于引物熔點5℃。錯誤的退火溫度可能導致引物不與模板結合或者錯誤地結合。該步驟時間1-2分鐘。

三、延伸:

DNA聚合酶由降溫時結合上的引物開始沿著DNA鏈合成互補鏈。此階段的溫度依賴于DNA聚合酶。該步驟時間依賴于聚合酶以及需要合成的DNA片段長度。傳統(tǒng)的Taq估計合成1000bp/min、較新的Tbr(來自于嗜熱菌Thermus brockianus)約40秒、商業(yè)公司生產的融合型聚合酶僅需約10-15秒。

PCR反應條件優(yōu)化:

1、變性溫度和時間:

保證模板DNA解鏈是保證整個PCR擴增成功的關鍵。加熱90~95°C, 30~60s,再復雜的DNA 分子也可變性為單鏈。溫度過高或高溫持續(xù)時間過長,可對Taq酶活性和dNTP分子造成損害。

2、復性溫度和時間:

PCR擴增特異性取決于復性過程中引物與模板的結合。復性溫度越高,產物特異性越高。復性溫度越低,產物特異性越低。需根據引物的Tm值具體設定。

3、延伸溫度和時間:

一般位于Taq酶最適作用溫度70~75°C之間。引物小于16個核苷酸時,過高的延伸溫度不利于引物與模板的結合,可以緩慢升溫到70~75°C。延伸反應時間,可根據待擴增片段的長度而定,小于1kb, 1min足夠;大于1kb需加長延伸時間。Taq酶可根據1kb/min增加時間。這里需要注意,延伸時間過長可能出現(xiàn)非特異擴增。因此需要設置恰到好處的延伸時間。

4、循環(huán)數(shù):

其他參數(shù)選定后,PCR循環(huán)次數(shù)主要取決于模板DNA的濃度。理論上說20?25次循環(huán)后,PCR產物的積累即可達到最大值,實際操作中由于每步反應的產率不可能達到100%,因此不管模板濃度是多少,20~30次是比較合理的循環(huán)次數(shù)。循環(huán)次數(shù)越多,非特異擴增增加。

公司正在出售的產品:

斑點氣單胞菌染料法熒光定量PCR試劑盒

白細胞共同抗原ELISA試劑盒 LCA/CD45免費代測試劑

木薯源性成分探針法熒光定量 PCR 試劑盒

假結核棒桿菌PCR檢測試劑盒說明書

乙酰化ELISA試劑盒 CHAc免費代測試劑

人分枝桿菌PCR檢測試劑盒價格

壞死性肝胰腺炎細菌(NHPB)核檢測試劑盒

細胞周期T2ELISA試劑盒

馬皰疹病毒4型(EHV-IV)核檢測試劑盒

雞特定基因序列PCR檢測試劑盒

蛋白SELISA試劑盒

馬皰疹病毒通用染料法熒光定量PCR試劑盒

馬腺病毒探針法熒光定量PCR試劑盒

電子轉移黃蛋白αELISA試劑盒

馬克洛菌探針法熒光定量PCR試劑盒

前病毒探針法熒光定量PCR試劑盒

毒蕈堿型乙酰受體亞型M3ELISA試劑盒

牛支原體(MYPB)核檢測試劑盒

羌蟲病立克次氏體探針法熒光定量PCR試劑盒

多肽-N-乙酰氨基半乳糖轉移10ELISA試劑盒

芹菜源性成分染料法熒光定量PCR試劑盒

馬蘇哈魚病毒探針法熒光定量PCR試劑盒

耳膠蛋白ELISA試劑盒

荔枝核染料法PCR鑒定試劑盒

馬乳頭瘤病毒PCR檢測試劑盒

法尼基二磷法尼基轉移1ELISA試劑盒

駑巴貝斯蟲探針法熒光定量PCR試劑盒

七星庫道蟲PCR檢測試劑盒

防御β127ELISA試劑盒

馬流感病毒HNPCR檢測試劑盒

鏈球菌組PCR檢測試劑盒直銷

人電壓門控鉀通道抗體(VGKC-ab)ELISA檢測試劑盒

腔闊盤吸蟲探針法熒光定量PCR試劑盒

牛瘟病毒探針法熒光定量PCR試劑盒

人硫軟骨(CS)試劑盒elisa

血球鏈菌染料法熒光定量PCR試劑盒

屎腸球菌染料法熒光定量PCR試劑盒

6min Fast 1st cDNA Synthesis Kit人補體片段4d(C4d)ELISA試劑盒

狂犬病病毒街毒株PCR檢測試劑盒

青蟹雙順反子病毒探針法熒光定量PCR試劑盒

β4整合(ITG β4/CD104)試劑盒ELISA

鵪鶉奇異線蟲探針法熒光定量PCR試劑盒

沙門氏菌SPP-sdfi核檢測試劑盒

人穿孔/成孔蛋白(PF/PFP)ELISA試劑盒

禽白血病/肉瘤病毒PCR檢測試劑盒

 


杭锦后旗| 阳西县| 南京市| 扬中市| 维西| 资源县| 长兴县| 林芝县| 静安区| 仁寿县| 乌拉特中旗| 察隅县| 察隅县| 姚安县| 个旧市| 南岸区| 新乡县| 拜泉县| 北辰区| 申扎县| 黎川县| 福清市| 本溪| 灵山县| 阿拉善盟| 琼中| 栾川县| 怀来县| 桂阳县| 车致| 阳新县| 同仁县| 饶河县| 黄冈市| 岑溪市| 镇远县| 东乡| 长治市| 陆良县| 邻水| 镇原县|