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2×Fast Taq PCR MasterMix( 含染料 )

簡要描述:

2×Fast Taq PCR MasterMix( 含染料 )公司正在出售的產(chǎn)品:人前庭鞘膜瘤細胞(永生化 1號染色體開放閱讀框130封閉多肽 同禽病毒性關(guān)節(jié)炎病毒禽腱鞘炎病毒PCR檢測試劑盒 大鼠可溶性CD30配體(sCD30L)試劑盒 ELISA 丙酮激(PK)活性比色法檢測試劑盒 毛核炭(山茶花炭疽病菌) IQCF1蛋白抗體

更新時間:2024-01-12

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2×Fast Taq PCR MasterMix( 含染料 )

商品屬性:

產(chǎn)品名稱

規(guī)格

貨號

2×Fast Taq PCR MasterMix( 含染料 )

1ml×5

A-Hc2089

QQ截圖20240110094643.jpg

儲存條件:-20℃保存。

制品說明:

 本產(chǎn)品包含F(xiàn)ast Taq DNA Polymerase、dNTPs、MgCl2、反應(yīng)緩沖液,濃度為2×。具有快速簡便、靈敏度高、特異性強、穩(wěn)定性好、減少非特異擴增和引物二聚體等優(yōu)點,可最大限度的減少人為誤差。適用于復雜模板的擴增、多重PCR、短鏈和長鏈DNA片斷的擴增。

本產(chǎn)品中的Fast Taq DNA Polymerase具有5′→3′DNA聚合酶活性和5′→3′外切核酸酶活性,無3′-5′外切酶活性。Fast Taq DNA Polymerase延伸速度最快可達6kb/min,產(chǎn)物可以直接用于T/A載體克隆。

本產(chǎn)品使用方便快捷,能避免 PCR 操作過程中的污染,使用時只需取適量2×Fast Taq PCR MasterMix溶液,加入模板和引物,并加入去離子水補足體積,使MasterMix溶液濃度為1×即可進行反應(yīng)。使用前請保證充分溶解并混勻,操作需在冰上進行。

產(chǎn)品內(nèi)容:0.05units/μl Fast Taq DNA Polymerase、4mMM gCl2、0.4mM dNTPs (dATP, dCTP, dGTP, dTTP)

質(zhì)量控制:經(jīng)檢測無外源核酸酶活性;PCR方法檢測無宿主殘余 DNA ;能有效地擴增人基因中的單拷貝基因;室溫存放一周,無明顯活性改變。

適用范圍:基因檢測:本產(chǎn)品不同批次之間誤差很小,特別適合大規(guī)?;驒z測,半定量PCR實驗和微量DNA的檢測。

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PCR基本步驟及注意事項?

一、實驗原理

PCR是體外人工選擇性擴增DNA的一種方法,它類似于生物體內(nèi)DNA的復制。在生物體內(nèi)DNA復制需要模板、引物、DNA聚合酶、DNA解旋酶、 dNTPs;而體外PCR反應(yīng)同樣需要類似的成分,有模板、引物、PCR Buffer、Taq酶、dNTPs。其中引物是人工設(shè)計的特定序列,實現(xiàn)對特定位置的擴增;PCR Buffer提供一個反應(yīng)的緩沖環(huán)境;反應(yīng)過程同生物體內(nèi)一樣,DNA雙鏈打開,引物結(jié)合模板,延伸形成新鏈。而這些過程在生物體內(nèi)靠DNA解旋酶解鏈,而在體外在通過控制反應(yīng)溫度實現(xiàn)的。如常用94℃變性模板DNA打開雙鏈,在退火溫度處引物結(jié)合到模板上,最后在72℃完成延伸,并反復重復此過程即可實現(xiàn)對特定片段DNA的大量擴增。到第三循環(huán)開始才產(chǎn)生出和靶DNA區(qū)段相同的DNA分子,進一步循環(huán)地產(chǎn)生出靶DNA區(qū)段的指數(shù)加倍。

在擴增后期,由于產(chǎn)物積累,使原來呈指數(shù)擴增的反應(yīng)變成平坦的曲線,產(chǎn)物不再隨循環(huán)數(shù)而明顯上升,這稱為平臺效應(yīng)。平臺期(Plateau)會使原先由于錯配而產(chǎn)生的低濃度非特異性產(chǎn)物繼續(xù)大量擴增,達到較高水平。因此,應(yīng)適當調(diào)節(jié)循環(huán)次數(shù),在平臺期前結(jié)束反應(yīng), 減少非特異性產(chǎn)物。到達平臺期(Plateau)所需循環(huán)次數(shù)取決于樣品中模板的拷貝。

二、主要的成分

1.模板可以是多種形式,主要包括基因組DNA、質(zhì)粒DNA、攜帶病毒的基因組DNA、PCR產(chǎn)物,cDNA等,但不能為RNA。對于不同類型的模板,其主要不同在于預(yù)變性的時間以及模板的量。一般對于大的基因組DNA預(yù)變性時間10min足夠,質(zhì)粒DNA2min、攜帶病毒的基因組DNA預(yù)變性2min、PCR產(chǎn)物預(yù)變性2min即可。

注意cDNA為單鏈DNA,但仍可做PCR的模板,只不過在第一輪循環(huán)時只有一個引物結(jié)合,合成另一條鏈。從第二輪開始,兩個引物均與特異位點結(jié)合,從而實現(xiàn)了與常規(guī)PCR的接軌。而同作為單鏈的RNA卻不能進行PCR擴增,原因就在于實現(xiàn)PCR反應(yīng)的是DNA聚合酶,只能特意識別DNA鏈。

2.對于模版的量來說,一般25ul體系DNA的質(zhì)量為50—100ng。對于基因組DNA由于其結(jié)構(gòu)比較復雜,提取的濃度也往往比較大,為防止?jié)舛冗^大對PCR造成影響,故需對提取的DNA進行梯度稀釋。否則濃度過高則可能會引起非特異性擴增。對于質(zhì)粒及PCR產(chǎn)物由于其結(jié)構(gòu)簡單,且提取濃度一般較低,則無需稀釋。

PCR實驗中應(yīng)該注意的問題有哪些?

沒有ct值

檢測結(jié)果遇到?jīng)]有Ct值情況,排查是否有以下問題:

1、循環(huán)數(shù)不夠(一般不超過45循環(huán),不僅背景值提高,定量也不準);

2、PCR程序設(shè)置錯誤,檢測熒光信號的步驟有誤。一般SG法采用72℃延伸時采集,TaqMan法則一般在退火結(jié)束時或延伸時采集信號,另外熒光采集是否選中;

3、引物或探針降解??赏ㄟ^PAGE電泳檢測引物和探針是否降解;

4、模板量可能降解或上樣量不足(不超過500ng,根據(jù)試劑盒說明書即可), 對未知濃度的樣本應(yīng)從系列稀釋樣本的最高濃度做起;如果發(fā)生模板降解,應(yīng)考慮樣本準備中雜質(zhì)的引入及反復凍融的情況,建議將模板樣本小量分裝儲備,避免反復凍融;

5、引物探針是否合適(尤其是引物跨越內(nèi)含子,以確保擴增基因組DNA;上下游引物Tm值超過4℃以上也會影響擴增)。

ct值過晚

在相對定量中, Ct值一般控制在15—25之間比較好,如果在絕對定量中, 對低拷貝數(shù)的樣品,Ct值會增大, 但是一般不宜超過40循環(huán), 否則定量不準確。

因此,判斷Ct值出現(xiàn)過晚是否屬于非正常情況, 需要根據(jù)具體實驗設(shè)計和目的進行。

1、擴增效率低。引物之間或者引物和探針的比例不合適, 需要進行優(yōu)化;引物或探針設(shè)計不合理, 需要重新設(shè)計;

2、PCR程序不合適, 改用三步法進行反應(yīng), 或者優(yōu)化退火/延伸溫度, 可以適當降低退火溫度; 退火/延伸時間短(可以在推薦的時間條件下延長10s);

3、MgCl2濃度不合適,增加鎂離子濃度等。PCR各種反應(yīng)成分的降解或加樣量的不足;

4、PCR產(chǎn)物太長。PCR產(chǎn)物設(shè)計超過500bp;

5、模板中存在抑制物。用高純度模板進行PCR檢測或?qū)⒛0暹M行稀釋。

公司正在出售的產(chǎn)品:

人乳頭瘤病毒13 染料法熒光定量PCR試劑盒

蛋白酪氨激ELISA試劑盒 PTK免費代測試劑

回歸熱疏螺旋體(回歸熱包柔螺旋體)染料法熒光定量PCR試劑盒

半夏染料法PCR鑒定試劑盒

不均一核核糖核蛋白UELISA試劑盒 HNRPU免費代測試劑

甲型流感病毒1亞型PCR檢測試劑盒直銷

玉米BT/MS PCR檢測試劑盒

冠蛋白1BELISA試劑盒

綿羊莫拉菌PCR檢測試劑盒

阪崎腸桿菌rpsU-dnaG 基因熒光PCR檢測試劑盒間序列(探針法)

層粘連蛋白β3ELISA試劑盒

綿羊莫拉菌染料法熒光定量PCR試劑盒

羅布羅布芽生菌染料法熒光定量PCR試劑盒

大皰性類天皰瘡抗體ELISA試劑盒

枯草桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒

禽腺病毒染料法熒光定量PCR試劑盒

ELISA試劑盒

豬牛絳蟲PCR檢測試劑盒

青霉通用探針法熒光定量PCR試劑盒

蛋白酪氨激ELISA試劑盒

牛型放線菌染料法熒光定量PCR試劑盒

路鄧葡萄球菌PCR檢測試劑盒

登革熱抗體IgMELISA試劑盒

羅斯肉瘤病毒PCR檢測試劑盒說明書

流行性腦膜炎雙球菌PCR檢測試劑盒

丁型肝炎IgMELISA試劑盒

南非諾卡菌探針法熒光定量PCR試劑盒

禽皰疹病毒通用探針法熒光定量PCR試劑盒

多肽-N-乙酰氨基半乳糖轉(zhuǎn)移6ELISA試劑盒

綿羊肺腺瘤病毒PCR檢測試劑盒

口蹄疫病毒C亞型探針法熒光定量RT-PCR試劑盒

人鉤端螺旋體IgG(Leptospira)試劑盒ELISA

牛丘疹性口炎病毒探針法熒光定量PCR試劑盒

芡實染料法PCR鑒定試劑盒

人血管內(nèi)皮鈣粘著蛋白復合體(VE-cad)elisa試劑盒

大棗染料法PCR鑒定試劑盒

彌散黏附性大腸桿菌(大腸埃希菌)探針法熒光定量PCR試劑盒

人對稱二甲基精氨(SMDA)ELISA檢測試劑盒

瘧原蟲通用探針法熒光定量PCR試劑盒

單核細胞增生李斯特菌探針法熒光定量PCR試劑盒

S100鈣結(jié)合蛋白A12/鈣粒蛋白C(S100A12)檢測試劑盒elisa

2×Fast Taq PCR MasterMix( 含染料 )五種致瀉性大腸桿菌PCR檢測試劑盒(PCR 熔解曲線法)

質(zhì)型多角體病毒PCR檢測試劑盒

人鼻病毒(RV)抗體(IgA)ELISA試劑盒

牛腺病毒3(BAV-3)核檢測試劑盒

 


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