操作步驟:
實(shí)驗(yàn)開始前,各試劑均應(yīng)平衡至室溫(試劑不能直接在37℃溶解);試劑或樣品稀釋時,均需混勻,混勻時盡量避免起泡。實(shí)驗(yàn)前應(yīng)預(yù)測樣品含量,如樣品濃度過高時,應(yīng)對樣品進(jìn)行稀釋,以使稀釋后的樣品符合試劑盒的檢測范圍,計(jì)算時再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。
1. 加樣:分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔??瞻卓准訕悠废♂屢?00μl,余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測樣品100μl,注意不要有氣泡,加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻,酶標(biāo)板加上蓋或覆膜,37℃反應(yīng)120分鐘。為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性,每次實(shí)驗(yàn)請使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。
2. 棄去液體,甩干,不用洗滌。每孔加檢測溶液A工作液 100μl(在使用前一小時內(nèi)配制),酶標(biāo)板加上覆膜, 37℃反應(yīng)60分鐘。
3. 溫育60分鐘后,棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分鐘,大約400μl/每孔,甩干(也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干)。
4. 每孔加檢測溶液B工作液(同檢測A工作液) 100μl,酶標(biāo)板加上覆膜37℃反應(yīng)60分鐘。
5. 溫育60分鐘后,棄去孔內(nèi)液體,甩干,洗板5次,每次浸泡1-2分鐘,350μl/每孔,甩干(也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干)。
6. 依序每孔加底物溶液90μl,酶標(biāo)板加上覆膜37℃避光顯色(30分鐘內(nèi),此時肉眼可見標(biāo)準(zhǔn)品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色,后3-4孔梯度不明顯,即可終止)。
7. 依序每孔加終止溶液50μl,終止反應(yīng),此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性,底物反應(yīng)時間到后應(yīng)盡快加入終止液。
8. 用酶聯(lián)儀在450nm波長依序測量各孔的光密度(OD值)。在加終止液后立即進(jìn)行檢測。
產(chǎn)品簡介:
產(chǎn)品名稱:檸檬酸(CA)含量試劑盒(酶法)科研
規(guī)格:24樣 48樣 48樣 96樣
貨號:AS272
檢測方法:紫外分光光度法 紫外分光光度法 微板法 微板法
產(chǎn)品分類:呼吸代謝途徑系列
貯存溫度:2~8℃。
本試劑盒保質(zhì)期:6個月。本產(chǎn)品僅用于科研實(shí)驗(yàn)。
試劑的組成和配制:
提取液:液體 100mL×1 瓶,4℃保存;
試劑一:液體 5mL×1 瓶,4℃保存;
試劑二:液體 200μL×1 支,4℃保存;
試劑三:液體 4mL×1 瓶,4℃保存;
試劑四:粉劑×2 瓶,4℃保存。
所需的儀器和用品:
可見分光光度計(jì)、1mL 玻璃比色皿(光徑 1cm)、低溫離心機(jī)、移液器、研缽、冰和蒸餾水
四、超氧化物歧化酶(SOD)的測定:
建議正式實(shí)驗(yàn)前選取 2 個樣本做預(yù)測定,了解本批樣品情況,熟悉實(shí)驗(yàn)流程,避免實(shí)驗(yàn)
樣本和試劑浪費(fèi)!
1、樣本制備
① 組織樣本:
取約 0.1g 組織(水分充足的樣本可取 0.25g),加入 1mL 提取液,在 4oC 或冰浴進(jìn)行
勻漿(或使用各類常見勻漿器)。4oC×12000rpm 離心 10min,取上清作為待測液。
【注】:若增加樣本量,可按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例進(jìn)行提取
② 細(xì)菌/細(xì)胞樣本:
先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;取約 500 萬細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL
提取液,超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,功率 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復(fù) 30 次);
12000rpm 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測。
【注】:若增加樣本量,可按照細(xì)菌/細(xì)胞數(shù)量(10
4):提取液(mL)為 500~1000:1 的比例進(jìn)行提取。 ③ 液體樣本:直接檢測;若渾濁,離心后取上清檢測。
Goat Anti-Chicken IgG/Cy3 Cy3標(biāo)記的羊抗雞IgG 規(guī)格: 0.1ml
Rabbit Anti-mouse IgG/Gold 膠體金標(biāo)記的兔抗小鼠IgG 規(guī)格: 0.5ml
RCS1/FAM64A 染色體分離調(diào)節(jié)1抗體 規(guī)格: 0.2ml
M-RAS/Mras 原基因M-ras抗體 規(guī)格: 0.1ml
BST1/CD157 骨髓基質(zhì)干細(xì)胞抗原1抗體 規(guī)格: 0.2ml
KLK10 激肽釋放10抗體 規(guī)格: 0.1mlPKA/PKAcat/PKACB 激A抗體 規(guī)格: 0.1ml
VGLL4 轉(zhuǎn)錄輔助因子退變樣4抗體 規(guī)格: 0.2ml
Rabbit Anti-horse IgM/PE-Cy7 PE-Cy7標(biāo)記的兔抗馬IgM 規(guī)格: 0.1ml
CKLFH8/CMTM8 趨化樣因子超家族成員8抗體 規(guī)格: 0.2ml
phospho-MYF5 (phospho Ser49) 磷化生肌決定因子Myf5抗體 規(guī)格: 0.1ml
NMDA-NR1/NR1/NMDAR1 天冬氨受體抗體 規(guī)格: 0.1mlMIER2 中胚層誘導(dǎo)早期反應(yīng)2抗體 規(guī)格: 0.2ml
檸檬酸(CA)含量試劑盒(酶法)科研蛋白質(zhì)A標(biāo)記二抗(抗人;抗兔;抗小鼠;抗大鼠) 100微升
HRP標(biāo)記二抗(抗人;抗兔;抗小鼠;抗大鼠) 100微升
AP標(biāo)記二抗(抗人;抗兔;抗小鼠;抗大鼠) 100微升
TRITC標(biāo)記二抗(抗人;抗兔;抗小鼠;抗大鼠) 100微升
Cy2標(biāo)記二抗(抗人;抗兔;抗小鼠;抗大鼠) 100微升
Cy3標(biāo)記二抗(抗人;抗兔;抗小鼠;抗大鼠) 100微升
Cy5標(biāo)記二抗(抗人;抗兔;抗小鼠;抗大鼠) 100微升
EGFP標(biāo)記二抗(抗人;抗兔;抗小鼠;抗大鼠) 100微升
免疫抗體標(biāo)記/內(nèi)參-抗試劑專題
GST(抗人;抗兔;抗小鼠;抗大鼠) 100微升